瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒

瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒

瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒原理簡(jiǎn)介
本試劑盒利用*的緩沖液，可從TAE或TBE瓊脂糖凝膠上回收DNA片段，同時(shí)除去其它有機(jī)化合物、無(wú)機(jī)鹽離子及寡核苷酸引物等雜質(zhì)。
對(duì)于切下后不超過(guò)150mg的凝膠塊，本試劑盒（以100T為例）可用100T。對(duì)于更小的凝膠塊，本試劑盒使用次數(shù)更多。

注意事項(xiàng)
1、電泳時(shí)使用新的電泳緩沖液，以免影響電泳和回收效果。
2、如下一步實(shí)驗(yàn)要求較高，則應(yīng)盡量使用TAE電泳緩沖液。
3、切膠時(shí)，紫外照射時(shí)間應(yīng)盡量短，以免對(duì)DNA造成損傷。
4、回收<200bp DNA片段時(shí)，應(yīng)加大溶膠液的體積（如5倍體積或者更高）。
5、回收率與初始DNA量和洗脫體積有關(guān)，初始量越少、洗脫體積越小，回收率越低。
6、如非指明，所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。
操作步驟
1．將單一的目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下（盡量切除多余部分）放入干凈的離心管中，稱(chēng)取凝膠重量(可以用同一包裝中的離心管去皮稱(chēng)量，各離心管間的誤差可忽略)。
2．向膠塊中加入3倍體積溶膠液（如果凝膠重為0.1g，其體積可視為100µl，則加入300µl溶膠液，如為小片段，可加入5倍體積或者更高體積），50-55℃水浴放置5-10分鐘，其間不斷溫和地上下翻轉(zhuǎn)離心管，以確保膠塊充分溶解。
3．玻璃奶混勻。取25ul混勻的玻璃奶加入上面溶解的溶膠液中。混勻。
4．室溫放置2-3分鐘。期間可翻轉(zhuǎn)混勻1-2次。
5．10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘，去上清；沉淀加入1ml 70%乙醇，振蕩混勻，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘，去上清，70%乙醇重復(fù)洗一次，再用無(wú)水乙醇洗一次。去上清，再次離心2分鐘，用小吸頭吸去上清（70%乙醇洗兩次，無(wú)水乙醇洗一次）。
6．室溫放置10分鐘，加入30－50ul TE緩沖液混勻溶解，50-55℃水浴5分鐘。離心，取上清轉(zhuǎn)移到一新的離心管中。此為所提質(zhì)粒。
7．電泳或者其他方法檢測(cè)，進(jìn)入下游實(shí)驗(yàn)。